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恒遠(yuǎn)總結(jié)：細(xì)胞活性的三種測(cè)定方法

更新時(shí)間：2011-11-30 點(diǎn)擊次數(shù)：3038

細(xì)胞活性測(cè)定方法

細(xì)胞活性測(cè)定方法有臺(tái)盼藍(lán)染色法、克隆（集落）形成法、3H放射性同位素?fù)饺敕ā?MTT法等。其中MTT法以其快速簡(jiǎn)便，不需要特殊檢測(cè)儀器、無放射性同位素、適合大批量檢測(cè)的特點(diǎn)而得到廣泛的應(yīng)用。但MTT法形成的Formazan 為水不溶性的，需要加有機(jī)溶劑溶解，由于在去上清操作時(shí)會(huì)有可能帶走小部分的Formazan，故有時(shí)重復(fù)性略差。為了解決這個(gè)問題，研究人員又開發(fā)了很多種水溶性的四氮唑鹽類：如XTT、CCK-8（WST-8）等。
現(xiàn)就這三種四氮唑鹽類方法作一個(gè)簡(jiǎn)單介紹：
1.MTT法
MTT：化學(xué)名： 3-（4，5-二甲基噻唑，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。
缺點(diǎn)：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測(cè)。這不僅使工作量增加，也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲的有機(jī)溶劑對(duì) 實(shí)驗(yàn)者也有損害。-2）-2

2.XTT法
XTT：化學(xué)名：2,3- bis（2-methoxy-4-nitro-5- sulfophenyl）-5-[（phenylamino）carbonyl]
-2H-tetrazolium hydroxide，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細(xì)胞還原成水溶性的橙黃色甲產(chǎn)物。當(dāng)XTT與電子偶合劑（例如 PMS）聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，其所產(chǎn)生的水溶性的甲產(chǎn)物的吸光度與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。
優(yōu)點(diǎn)：1、使用方便，省去了洗滌細(xì)胞；2、檢測(cè)快速；3、靈敏度高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度；4、重復(fù)性優(yōu)于MTT。
缺點(diǎn)：XTT水溶液不穩(wěn)定，需要低溫保存或現(xiàn)配現(xiàn)用。

3.CCK-8法或稱WST-8法
CCK-8試劑中含有WST–8：化學(xué)名：2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2H-四唑單鈉鹽]，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 *（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。的甲物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已被廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)等。
優(yōu)點(diǎn)：1、使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；2、檢測(cè)快速；3、靈敏度高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度；4、重復(fù)性優(yōu)于 MTT；5、對(duì)細(xì)胞毒性小；6、為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用。
缺點(diǎn):1、與MTT相比，CCK-8和XTT的價(jià)格比較貴。2、CCK-8試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，不注意的話容易產(chǎn)生漏加或多加。

三種方法的比較

	MTT法	XTT法	CCK-8法（WST-8法）
甲臜物水溶性	難溶性	水溶性	水溶性
檢測(cè)波長	490 nm	450nm	450nm
性狀	粉末	2瓶溶液	1瓶溶液
使用方法	配成溶液后使用	現(xiàn)配現(xiàn)用	毋需預(yù)制
使用有機(jī)溶劑	DMSO或其它溶劑	—	—
方便性	+	++	+++
檢測(cè)速度	+	++	+++
重復(fù)性	+	++	++
穩(wěn)定性	++	+	++
工作量	---	--	-
對(duì)細(xì)胞毒性	---	--	-
對(duì)人體毒性	---	-	-

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